位于长辛店花园南里甲15号。占地面积约6600平方米，建筑面积达2382平方米，展室面积1000平方米。馆内收藏有光绪三十一年（1905年）黄河铁桥竣工纪念铁碑；京汉铁路通车后，长辛店火车站用过的大钟；1921年工会收缴会费用过的小布口袋；1922年工人俱乐部证章；“八月罢工”时用的汽笛；1923年京汉铁路总工会证章；二七大罢工工人纠查队员用过的斧子和大锤把；被捕工人在保定监狱戴过的手铐脚镣等主要文物。

长辛店地处北京西南，自古为交通咽喉和军事重地1897年，卢（沟桥）汉（口）铁路（又称京汉铁路、平汉铁路，今京广铁路北段）开工，次年，长辛店站建成。著名的长辛店铁路工厂也坐落在这里。北京共产主义小组成立后，于1921年元旦派邓中夏等到长辛店铁路工人中创办了劳动实习学校。在1923年的二七大罢工之前，长辛店的铁路工人于1922年8月24日至26日已经进行了一次大罢工。在八月罢工胜利的影响下，铁路工运蓬勃发展。1923年1月5日，京汉铁路工人决定2月1日在郑州正式举行京汉铁路总工会成立大会。2月1日，各京汉铁路总工会在河南郑州正式成立。2月2日，总工会发表罢工宣言，号召工人阶级“为争自由而战！为争人权而战！” 2月4日，全路3万余工人举行总罢工。2月5日和6日，军警在长辛店、郑州、江岸等地逮捕工人和工人领袖，强迫工人复工，均告失败。2月6日深夜，军阀军队逮捕了罢工领导人史文彬等。7日晨，3000多名工人涌向警察驻地火神庙，高呼着“还我们的工人”，“还我们的自由”等口号。军警开枪射击，又加马队冲撞、践踏，葛树贵、吴祯等人当场牺牲。重伤29人，被捕20余人，二七革命斗争失败。为纪念二七大罢工运动，1983年由中华全国总工会、铁道部和北京市共同投资兴建二七纪念馆。中央领导王震、倪志福等为二七纪念馆奠基，“长辛店二七纪念馆”几个镏金大字由彭真同志题写。在1987年2月7日，京汉铁路工人大罢工六十四周年纪念日正式向社会开放。